การเตรียมมาตรฐาน:
เตรียมมาตรฐานสต็อกแบบผสมโดยการชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ (± 0.01 มก.) ประมาณ 10 มก. ของแต่ละมาตรฐานอ้างอิง kavalactone ในขวดปริมาตร 10 มล. เพิ่มเมธานอลและ sonicate 7.0 มล. จนกระทั่งละลาย เจือจางปริมาตรด้วยเมทานอลและผสม
แจ้งให้ทราบล่วงหน้า: อีกทางหนึ่งให้เตรียมมาตรฐานหุ้น kavain ในลักษณะที่คล้ายกันและใช้ปัจจัยตอบสนอง kavalactone เพื่อหาจำนวน
เจือจางมาตรฐานหุ้นเพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐานขั้นต่ำสี่จุด การเจือจางมาตรฐานที่แนะนำของสต็อกคือ 1:10, 1:25 และ 1: 100 โดยใช้เมทานอล
แจ้งให้ทราบล่วงหน้า: เก็บมาตรฐานที่อุณหภูมิห้องเย็น (0 - 5 ° C) Kavalactones ลดลงอย่างรวดเร็วหลังจาก 48 ชั่วโมง เตรียมการอ้างอิงมาตรฐานใหม่ก่อนที่จะทำการวิเคราะห์แต่ละครั้ง
อุปกรณ์
·สอบเทียบเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ที่แม่นยำถึง± 0.01 มก
·กระติกน้ำปริมาตร Class A ขนาดคละ
·ขวดโครมาโตกราฟีพร้อมฝาปิด
· ระบบโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงตามที่อธิบายไว้ในบท USP ตรวจสอบและจัดทำเอกสารว่าเครื่องมือซอฟต์แวร์และระบบย่อยตรงตามข้อกำหนดด้านประสิทธิภาพสำหรับการรับรองการติดตั้ง / คุณสมบัติการปฏิบัติงาน (IQ / OQ)
·ตัวกรอง, 0.45 ไมโครเมตร, เจลแมน Acrodisc ไนล่อน (P / N 4426), โพลีโพรพีลีน Whatman Puradisc ™ (แมว หมายเลข 6788-2504), Whatman GD / X Glass (Cat. เลขที่ 6894-2504) หรือเทียบเท่า Sonicator
·คอลัมน์, YMCbasic, 5 µm, 4.6 x 250 มม. ( เลขที่ แมว BA99S05-2546WT) คอลัมน์เทียบเท่า, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4.6 x 250 (ประเภทแมว JH08S04-2546WT)
รีเอเจนต์
·น้ำเกรด HPLC หรือ Nanopure
·เมทานอลเกรด HPLC
· Acetonitrile เกรด HPLC
·กรดฟอสฟอริก, เกรดรีเอเจนต์ ACS
การจัดเตรียมตัวอย่าง:
วัสดุพืช
น้ำหนักอย่างแม่นยำ (± 0.1 มก.) ประมาณ 750 มก. ของก้านดินบดละเอียดหรือวัสดุราก
วางวัสดุลงในขวดปริมาตร 50 มล. พร้อมกับเมทานอล / น้ำ 40 มล. (70/30) Sonicate เป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
อนุญาตให้ขวดเย็นให้เย็นที่อุณหภูมิห้องและเจือจางปริมาตรด้วยเมทานอล / น้ำ (70/30) และผสม
กรองและวางตัวอย่างลงในขวด HPLC และฝาปิด
ผงและสารสกัดจากนุ่ม (วาง)
ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ (± 0.1 มก.) ประมาณ 100 มก. ของสารสกัดลงในขวดปริมาตร 50 มล. (น้ำหนัก 100 มก. ขึ้นอยู่กับเนื้อหา kavalactone 50-60% ในสารสกัด) หมายเหตุ: สารสกัดที่เป็นเนื้อเดียวกันอย่างระมัดระวังก่อนการสุ่มตัวอย่าง นี่คือความสำเร็จโดยการวางสารสกัดในภาชนะที่แช่ในอ่างน้ำร้อน 60 ° - 80 ° C จนไหลฟรี
เพิ่มเมธานอลและ sonicate 40 มล. เป็นเวลา 10 นาทีหรือจนกว่าของแข็งทั้งหมดจะละลาย
อนุญาตให้ขวดเย็นตัวที่อุณหภูมิห้องและเจือจางปริมาตรด้วยเมทานอลและผสม
กรองและวางตัวอย่างลงในขวด HPLC และฝาปิด
ตัวอย่างผง
สารสกัดจากคาวานั้นมักจะถูกผสมหรือสเปรย์ให้แห้งบนพาหะต่างๆเพื่อทำการทดสอบตัวอย่างผงได้สำเร็จจำเป็นต้องพัฒนาขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่จะกู้คาวาแลคโตนออกจากตัวพา สิ่งนี้สามารถทำได้โดยการสกัดด้วยเมทานอลบริสุทธิ์หรือน้ำ
เงื่อนไขของ Chromatographic:
คอลัมน์: YMCbasic, 5 µm, 4.6 x 250 mm
อุณหภูมิคอลัมน์: 40 ° C
อัตราการไหล: 0.6 มล. / นาทีสำหรับ YMCbasic; 1.0 mL / นาทีสำหรับ J'Sphere
เฟสเคลื่อนที่: กรดฟอสฟอริกไอโซโทป 0.1%: ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์: acetonitrile (64:16:20 v / v)
การตรวจจับ: 220 นาโนเมตร (246 นาโนเมตรหรือปรับปรุงการเลือก)
ปริมาณการฉีด: 5 µL
เวลารัน: 30 นาที
ขั้นตอน:
จัดทำสารละลายมาตรฐานอ้างอิงและการเตรียมตัวอย่างตามที่ระบุไว้
ทำให้ตัวทำละลายแบบฉีดเดียวว่างเปล่า
ทำการฉีดครั้งเดียวของการเตรียมการมาตรฐาน
สร้างพล็อตเชิงเส้นของพื้นที่จุดสูงสุดมาตรฐานเทียบกับความเข้มข้นมาตรฐาน
ทำการฉีดตัวอย่างครั้งเดียว
คำนวณความเข้มข้น kavalactone ในตัวอย่าง
ความเหมาะสมของระบบ:
ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของการถดถอยเชิงเส้นต้องเท่ากับ≥ 0.999 ความละเอียดระหว่างยอด desmethoxyyangonin และยอดของ Yangonin ต้องเป็น≥1.8
มณฑลส่านซี Y-Herb เทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด